生物(wù)缓冲液在蛋白纯化中的选择

发布时间: 2022-08-20

蛋白质的结构和功能(néng)需要在合适的pH值环境中才能(néng)维持，因此在蛋白的制备及纯化过程中，生物(wù)缓冲液的选择非常重要，只有(yǒu)合适的缓冲液才能(néng)保证蛋白的活性和结构稳定。

蛋白纯化过程缓冲液作用(yòng)

用(yòng)于蛋白纯化的缓冲剂有(yǒu)很(hěn)多(duō)种，在维持體(tǐ)系的pH同时，要保证蛋白在纯化过程中不能(néng)失活，或者是尽量减少蛋白失活的量，在蛋白纯化的每一个步骤中都要保持蛋白的可(kě)溶性和活性。

蛋白纯化缓冲液要求

蛋白纯化过程中的缓冲液既要防止蛋白降解，也要防止蛋白聚合，其对实验结果影响显著。在选择和试剂缓冲液时应考虑以下几个因素：pH值、缓冲體(tǐ)系、盐离子、还原剂和稳定剂。其中每一个因素都要根据所纯化的目标蛋白进行优化，并以目标蛋白的活性作為(wèi)优化的评估标准。

了解蛋白稳定性条件

蛋白的种类很(hěn)多(duō)，不同的蛋白适应的pH值有(yǒu)差异，需根据其最适pH值来选择缓冲液。很(hěn)多(duō)时候采用(yòng)的是pH是7.4，这是模仿的生物(wù)条件，大多(duō)数蛋白在这个pH值下是稳定的。不过也有(yǒu)一些是例外的，这就需要调整pH值，以保持蛋白是可(kě)溶的且不会降解。

蛋白纯化常用(yòng)的缓冲剂

蛋白纯化过程中常用(yòng)的缓冲液有(yǒu)Tris、Tricine、Bis-Tris、MOPS等，其中普遍的是用(yòng)Tris，它的缓冲范围接近生理(lǐ)pH值，且有(yǒu)着较低的离子强度，是蛋白质的良好溶剂，能(néng)保证蛋白的稳定性。需注意的是配制缓冲液时，尽量避开目标蛋白的等電(diàn)点pl。因為(wèi)蛋白在其等電(diàn)点的pH溶液中表面没有(yǒu)静電(diàn)荷，带百分(fēn)子间排斥力减小(xiǎo)，容易聚集，溶解度降低。

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