生物(wù)缓冲液都有(yǒu)哪些，究竟应该怎么选呢(ne)？

发布时间: 2020-01-22

生物(wù)缓冲液是一种能(néng)在加入少量酸或碱时保持溶液的pH值相对稳定的溶液，多(duō)数细胞仅能(néng)在很(hěn)窄的pH范围内进行活动，需要有(yǒu)缓冲體(tǐ)系来抵抗在代謝(xiè)过程中出现的pH变化。在生化研究工作中，常常要用(yòng)到缓冲溶液来维持实验體(tǐ)系的酸碱度。

让我们来看看常用(yòng)的生物(wù)缓冲液，以及它们的特点:

1. 磷酸盐缓冲液

磷酸盐缓冲液是应用(yòng)最广泛的缓冲液。由于其二次离解作用(yòng)，缓冲液pH值范围较宽，可(kě)配置不同pH值的酸性、碱性和中性缓冲液:

制备酸性缓冲液可(kě)直接使用(yòng)NaH₂PO₄或KH₂PO₄, pH值范围為(wèi)1~5;

碱性缓冲液可(kě)直接使用(yòng)Na₂HPO₄或K₂HPO₄, pH范围為(wèi)9~12;

中性缓冲液中含有(yǒu)等量的NaH₂PO₄和Na₂HPO₄或等量的KH₂PO₄和K₂HPO₄溶液，pH值為(wèi)5.5~8.5。

优点：①易于配制成各种浓度；②pH值范围宽；③pH受温度的影响小(xiǎo)；

缺点：①易与常见的钙、镁、重金属离子形成沉淀；②抑制某些生化过程；

2. Tris缓冲液

Tris缓冲液在生物(wù)化學(xué)研究中有(yǒu)着广泛的应用(yòng)。它是弱碱，通常在“中性”范围内使用(yòng)。Tris-HCl缓冲:pH = 7.5 ~ 8.5;三磷酸缓冲液:pH = 5.0 ~ 9.0。

除TRIS - hcl外，TRIS还有(yǒu)多(duō)种衍生化缓冲:

TBS=Tris-HCl+ NaCl+KCl，常用(yòng)来清洗免疫染色组织或Western blotting中的Western blotting膜;

TBST=Tris-HCl+NaCl+tween20，一种常用(yòng)于Western Blotting的膜缓冲液;

TE=Tris-HCl+EDTA，对DNA碱基具有(yǒu)保护作用(yòng)，常用(yòng)于DNA的稳定和储存;

TAE=Tris碱+乙酸+EDTA，是一种广泛应用(yòng)于短片段DNA電(diàn)泳的缓冲體(tǐ)系;

       TBE=三碱基+peng酸+EDTA，适用(yòng)于長(cháng)期DNA電(diàn)泳，对小(xiǎo)片段有(yǒu)较好的分(fēn)离效果。
       优点： ①因為(wèi)Tris碱的碱性较强，所以可(kě)以只用(yòng)这一种缓冲體(tǐ)系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液；②对生物(wù)化學(xué)过程干扰很(hěn)小(xiǎo)，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。
       缺点：①缓冲液的pH值受溶液浓度影响较大，缓冲液稀释十倍，pH值的变化大于0.1；②温度效应大，温度变化对缓冲液pH值的影响很(hěn)大，所以一定要在使用(yòng)温度下进行配制，室温下配制的Tris-HCl缓冲液不能(néng)用(yòng)于0℃～4℃。 ③易吸收空气中的CO2，所以配制的缓冲液要盖严密封。④此缓冲液对某些pH電(diàn)极发生一定的干扰作用(yòng)，所以要使用(yòng)与Tris溶液具有(yǒu)兼容性的電(diàn)极。

3. Good’s缓冲液

在 1960 年代中期，N.E.Good鉴于一般的缓冲液系统并不适合生化实验所使用(yòng)，必须用(yòng)人為(wèi)设计和人工合成的方法来找到专门用(yòng)于生命科(kē)學(xué)研究的特定的缓冲體(tǐ)系，这些缓冲體(tǐ)系们都具有(yǒu)以下特质：

1.pKa 在6~8 之间；2.在水溶液中有(yǒu)高溶解度；3.盐效应很(hěn)小(xiǎo)；4.不易被运送通过细胞膜；5.不易受温度、离子组成、浓度等因素影响解离度；6.不会与金属离子形成错合物(wù)，或错合物(wù)不沉淀、不干扰生物(wù)活性；7.化學(xué)性质稳定。

Good’s缓冲液的主要优点是不参加和不干扰生物(wù)化學(xué)反应过程，对酶化學(xué)反应等无抑制作用(yòng)，所以它们专门用(yòng)于细胞器和极易变性的、对pH敏感的蛋白质和酶的研究工作。

其缺点是：①价格昂贵，②对测定蛋白质含量的双缩脲法和Lowry法不适用(yòng)，因為(wèi)它们会使空白管的颜色加深。

4.甘氨酸缓冲液

甘氨酸缓冲液pH值范围广，应用(yòng)范围广。pH值范围為(wèi)2.0~11.0。最常见的體(tǐ)系和pH值范围如下表所示:

甘氨酸缓冲液	pH值范围
甘氨酸-HCl	2.0~5.0
甘氨酸-NaOH	8.0~11.0
甘氨酸-Tris	8.0~11.0
甘氨酰胺缓冲液	7.8~8.8
甘氨酰甘氨酸缓冲液	8.0~9.0

优点：為(wèi)细胞成分(fēn)和各种提取物(wù)提供更亲近的自然环境。

缺点：类似于磷酸盐缓冲體(tǐ)系;干扰某些生化反应过程，例如代謝(xiè)过程。

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