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化學(xué)发光免疫测定(CLIA),是用(yòng)化學(xué)发光剂直接标记抗原或抗體(tǐ)的一类免疫测定方法。吖啶酯是较為(wèi)理(lǐ)想的发光底物(wù),在碱性环境中即可(kě)被过氧化氢氧化而发光。它是目前发展和推广应用(yòng)较快的免疫分(fēn)析方法,也是目前较為(wèi)先进的标记免疫测定技术,灵敏度和精确度比酶免法、荧光法高几个数量级,可(kě)以完全替代放射免疫分(fēn)析、淘汰酶联免疫分(fēn)析。主要具有(yǒu)灵敏度高、特异性强、试剂价格低廉、试剂稳定且有(yǒu)效期(6-18个月)、方法稳定快速、检测范围宽、操作简单自动化程度高等优点。
用(yòng)作标记的化學(xué)发光剂应符合条件:
1、能(néng)参与化學(xué)发光反应。
2、与抗原或抗體(tǐ)偶联后能(néng)形成稳定的结合物(wù)试剂。
3、偶联后仍保留高的量子效应和反应动力。
4、应不改变或极少改变被标记物(wù)的理(lǐ)化特性,特别是免疫活性。
鲁米诺类和吖啶酯类发光剂等均是常用(yòng)的标记发光剂。
化學(xué)发光免疫分(fēn)析中所使用(yòng)的标志(zhì)物(wù)分(fēn)类:
1、直接化學(xué)发光剂,直接用(yòng)化學(xué)发光剂标记抗原或抗體(tǐ)。
吖啶酯是目前常用(yòng)的直接标记发光剂。
吖啶酯在碱性条件下被H2O2氧化时,发出波長(cháng)為(wèi)470nm的光,具有(yǒu)很(hěn)高的发光效率,其激发态产物(wù)N-甲基吖啶酮是该发光反应體(tǐ)系的发光體(tǐ)。吖啶酯类发光剂可(kě)直接用(yòng)于标记半抗原和蛋白质等。用(yòng)于标记抗體(tǐ)时,结合稳定,结合后并不减少光量子的产生,可(kě)获得高的比活性,有(yǒu)利于双位点化學(xué)发光免疫分(fēn)析的建立。
2、酶促反应发光剂利用(yòng)标记酶(辣根过氧化物(wù)酶和碱性磷酸酶)的催化作用(yòng),使发光剂(底物(wù))发光。
辣根过氧化物(wù)酶催化的发光剂為(wèi)鲁米诺及其衍生物(wù)。
鲁米诺及其衍生物(wù) 鲁米诺、异鲁米诺及其衍生物(wù)都有(yǒu)化學(xué)发光特性。鲁米诺是最早合成的发光物(wù)质。
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