X-Gal与X-α-gal有(yǒu)什么不同？二者可(kě)以互相替换吗？

发布时间: 2022-04-15

　　X-Gal是E.coliβ-半乳糖苷酶（LacZ）的反应底物(wù)，而X-α-gal是酵母α-半乳糖苷酶（MEL1）的反应底物(wù)。X-α-gal用(yòng)作酵母双杂交系统中蓝白筛选的筛选标记。二者不可(kě)以互相替换。

　　X-Gal用(yòng)于检测β-半乳糖苷酶（LacZ）的活性。由于β-半乳糖苷酶不能(néng)分(fēn)泌，需裂解酵母细胞后通过加入β-半乳糖苷酶溶液和filter-liftassays才能(néng)进行显色。因此操作流程相对繁琐。

　　一、涂布于预制平板：

　　2）涂布200μL(15cm) 或者100μL（10cm）X-α-gal储存液于预制平板上；

　　4） 将转化细菌或酵母涂于平板上，于37℃或30℃培养直至蓝色菌落出现。

　　二、直接加入琼脂中：

　　2）将已灭菌琼脂培养基冷却至50-55℃；

　　试剂准备

• 　　16.1g/L   Na2HPO4·7H2O

  　　0.75g/L   KCl

  　　调节pH7.0，高温高压灭菌。可(kě)室温保存。　

  　　

  • 　　100mL     Zbuffer

    　　0.27mL    β-mercaptoethanol

    　　实验流程

    　　2. 配制Zbuffer/X-gal反应液;

    　　4.用(yòng)镊子另取一张无菌、干燥的滤纸，铺在划線(xiàn)培养的酵母菌表面，用(yòng)镊子轻轻滚压，使菌转移到滤纸表面(注:在滤纸上做好方位标记，以便识别菌种编号);

    　　6. 取出滤纸，放置于一干净平皿中使其室温解冻;

    　　注意事项：

    　　2.液氮冰冻菌的时候可(kě)以试试反复冻融，这样会使细胞破碎的更加完全一些，便于染色液的渗透。