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缓冲溶液作為(wèi)重要的实验溶液,经常会在各大生物(wù)实验操作中出现,其主要作用(yòng)就是对反应體(tǐ)系的PH值有(yǒu)平衡作用(yòng),作為(wèi)受青睐的溶液之一,在实验中选择使用(yòng)时也有(yǒu)很(hěn)多(duō)条件限制。所以接下来,就具體(tǐ)给大家谈一谈实验中使用(yòng)缓冲液的选择要求。
一、生物(wù)缓冲剂pH值的选择
实验中的缓冲范围必须要符合反应體(tǐ)系的pH值才能(néng)保证实验结果的准确性以及避免操作过程中出现干扰性,缓冲范围的pH值通常取决于電(diàn)离解数pKa值,但是pKa值又(yòu)和盐或酸浓度有(yǒu)关,所以常根据公式来进行计算。理(lǐ)论上缓冲范围PH值在9.4-11.7之间,但在实际的实验中為(wèi)了保证准确度,通常会采用(yòng)pH值在9.7-11.7之间的缓冲液,例如:CAPS缓冲液。有(yǒu)时可(kě)能(néng)也会根据实验目的,使用(yòng)其它范围的pH值,但都需要进行选择,不能(néng)完全使用(yòng)同一种范围的pH。
二、電(diàn)离平衡常数及缓冲范围要求
有(yǒu)很(hěn)多(duō)测定实验中会要求反应溶液的PH值稳定在一定的范围内,以保证实验进程不发生变化,通过加入一定量的缓冲液,达到中和,使得缓冲范围控制在所需要的范围内。另外,有(yǒu)时在采用(yòng)電(diàn)位滴定法测定时,需要不同配比且是同一种缓冲液的滴定曲線(xiàn),这时对于電(diàn)离平衡常数也有(yǒu)要求,需要特别注意。
三、生物(wù)缓冲剂的使用(yòng)限制条件
通常情况下,缓冲范围合理(lǐ),符合反应體(tǐ)系,就需考虑反应體(tǐ)系的限制性条件,例如:PBS缓冲液会络合金属离子钙,酶等,而有(yǒu)些反应體(tǐ)系中酶或蛋白质活性却受到金属离子的影响,这时就不能(néng)使用(yòng)此种缓冲液。另外,还有(yǒu)一些其它类型的缓冲液也是需要根据实验测定目的来使用(yòng),并非使用(yòng)一种缓冲液适用(yòng)于所有(yǒu)的生物(wù)实验。
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