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生物(wù)缓冲液通常是生化检测和生物(wù)实验中使用(yòng)非常普遍的一种辅助试剂,例如:Bicine,Bicine缓冲剂具有(yǒu)维持體(tǐ)系pH值稳定,确保反应进行、促进酶的活性及蛋白核酸结构稳定等特性。其中一个关键性作用(yòng)就是对體(tǐ)系酸碱度的改变起到缓冲,这时Bicine缓冲液的PH值就会变得格外重要,但有(yǒu)时会因為(wèi)一些因素的影响改变PH值,这时就需要特别去注意一下它的PH值是由什么来决定的?
一、PH值由pKa决定
Bicine缓冲液PH值的大小(xiǎo)是由构成缓冲剂的共轭酸碱对的pKa以及缓冲比共同决定,但是pKa起决定性作用(yòng),缓冲比起到的影响较小(xiǎo)。因此在配制成缓冲溶剂后,在未确定选用(yòng)何种缓冲剂的情况下,首先需要根据所需的PH值查找对应缓冲范围的缓冲剂,缓冲剂的pKa与所需pH值越接近越好。此外,还需注意缓冲剂对體(tǐ)系反应是否产生不良反应,如果碰上多(duō)种缓冲剂PH值符合要求,可(kě)选择溶解性好,无毒无害,稳定性强且易储存的缓冲液。
二、PH值由调节缓冲比来决定
如果是确定了缓冲剂,其PH值的改变有(yǒu)时会受缓冲比调节的影响,例如Bicine的PH值升高就会增加氢氧化钠比例,pH降低则会增加Bicine比例。
三、PH值由缓冲液浓度、离子强度及渗透压决定
缓冲溶液的浓度越大,其缓冲效果自然更佳,缓冲能(néng)力更强,但需要注意的是并非浓度越高越好,在确定配制缓冲溶液时,PH值也会受到总浓度的影响,以及需要考虑离子强度及渗透压对反应體(tǐ)系的影响。
上述三点是决定Bicine缓冲溶液PH值范围的关键因素,使用(yòng)过程中需要多(duō)加注意。
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