ris-HCl缓冲液用(yòng)于蛋白纯化中需要注意的问题

发布时间: 2023-02-12

近期，很(hěn)多(duō)实验室会在蛋白纯化过程中使用(yòng)生物(wù)缓冲液，此时挑选适合的缓冲剂就显得格外重要。很(hěn)多(duō)人会特别挑选Tris一类的，认為(wèi)离子强度低，缓冲能(néng)力强，其PH值接近生理(lǐ)范围，是蛋白的良好溶剂。但其实Tris-HCl缓冲液也可(kě)以用(yòng)于蛋白纯化，只不过為(wèi)了保证纯化效果，在实验过程中还是需要注意一些问题。

一、注意Tris-HCl的浓度

在纯化实验中确定了缓冲液的pH值和Tris-HCl的缓冲體(tǐ)系，就能(néng)知晓它设定的PH缓冲作用(yòng)，通常情况下缓冲剂解离常数pKa在设定pH值上下一个单位内具有(yǒu)缓冲作用(yòng)。仅仅只有(yǒu)缓冲范围和解离常数复合遠(yuǎn)遠(yuǎn)不够，另外还需确保缓冲液Tris-HCl的浓度足够高，才能(néng)起到实际效果，一般浓度為(wèi)20-100mM。

二、注意Tris-HCl对温度的敏感度

Tris系列的缓冲體(tǐ)系对温度都比较敏感，比如在25℃时将Tris-HCl调至pH為(wèi)8，pH值将在5℃时增加到8.58，而在37℃时降到7.71。因此在4℃条件下保存蛋白或在37℃进行实验，就应该考虑到室温下调的pH值可(kě)能(néng)在实验条件中是否适用(yòng)。

三、注意Tris-HCl缓冲液中的盐

蛋白纯化实验中用(yòng)Tris-HCl缓冲液，需要添加氯化钠以提高盐浓度，以协助维持蛋白的可(kě)溶性和模拟生理(lǐ)条件，一般常用(yòng)浓度150mM。离子交换层析进行蛋白纯化开始时，需降低盐浓度减少竞争，凝胶过滤柱和Ni2+亲和层析柱则需提高浓度。缓冲液體(tǐ)系对蛋白的活性不会有(yǒu)干扰，Tris-HCl中不能(néng)含有(yǒu)磷酸盐，否则就会抑制某些蛋白的活性，反应前会完全透析掉。

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