酶联免疫底物(wù)Trinder's试剂与TMB

发布时间: 2022-01-26

酶联免疫分(fēn)析是體(tǐ)外诊断技术中使用(yòng)普遍且应用(yòng)时间比较久的一种分(fēn)析检测技术，其用(yòng)到的设备仪器简单，各种实验环境下都可(kě)以操作，灵敏度也比较高，具有(yǒu)多(duō)方面的优势。酶联免疫所使用(yòng)的底物(wù)除了大家熟知的ELISA中的TMB之外，还有(yǒu)新(xīn)型Trinder’s试剂等。

色原底物(wù)新(xīn)型Trinder’s试剂

新(xīn)型Trinder’s试剂是在传统Trinder’s试剂的基础上通过官能(néng)团的取代优化改进而来，稳定性和灵敏度更好。它的种类很(hěn)多(duō)，目前已经研发并销售的有(yǒu)9种，包括TOOS、TOPS、MAOS、ADPS等等。不同的Trinder’s试剂的氧化产物(wù)，其蕞大吸收光波長(cháng)和摩尔吸光系数不一样，分(fēn)别适用(yòng)于不同生化指标的检测。

Trinder’s试剂检测原理(lǐ)

Trinder’s试剂属于HRP的氧化耦联色原底物(wù)对，和4-氨基安替（4-AAP）比邻耦联氧化显色（也可(kě)用(yòng)2-甲基-2苯并噻唑啉酮腙MBTH，但应用(yòng)较少）。在H202存在下，4-氨基安替比林和新(xīn)型Trinder’s试剂经HRP作用(yòng)缩合形成红色的醌亚胺类物(wù)质，其在特定波長(cháng)处有(yǒu)zui大吸收，大于540nm，检测波長(cháng)紫外區(qū)，干扰少。

色原底物(wù)TMB

TMB即四甲基联苯胺，是ELISA试剂盒中所使用(yòng)的酶联免疫底物(wù)。它属于一种氧化还原色原底物(wù)，其氧化产物(wù)联苯醌在波長(cháng)450nm（吸收光為(wèi)蓝光）处有(yǒu)蕞大消光系数。当酶HRP量少，过氧化氢溶液和TMB过量时，则形成蓝色的阳离子根，降低pH，即可(kě)使蓝色的阳离子根转变為(wèi)黄色的联苯醌。硫酸作為(wèi)终止剂可(kě)使产物(wù)稳定90min，1%SDS作為(wèi)终止剂可(kě)使鲜蓝色24h内保持不变，但有(yǒu)较强的褪色作用(yòng)。

新(xīn)型Trinder’s试剂与TMB相比，成本更高一些，不如TMB适用(yòng)广泛，不过它们的吸收波長(cháng)要更高，MAOS试剂更是达到了630nm。

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